2. Молибдат аммония (NН4)2MoO4, 2% водный раствор. 3. 3М ацетатный буфер, рН 4,5. 4. Раствор аскорбиновой кислоты с концентрацией 10 мг/мл.


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте его и откройте на своем компьютере.
Фамилия

________________________ Шифр_____________

Имя


________________________

Регион

________________________

Шифр

________________________




Вариант № __________


Задания

практического тура регионального этапа XXXI
V

Всеро
ссийской

олимпиады школьников по биологии. 2017
-
18 уч. год.

11

класс
, кабинет БИОХИМИИ


Сначала внимательно проч
тите

все задание!


ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФАТА И РАСЧЕ
Т АКТИВНОСТИ
ФОСФАТАЗЫ И СОДЕРЖАНИЯ ФОСФОРА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ



Для опре
деления неорганического фосфата Вам предоставляются следующие
реактивы:

1.

Стандартный р
аствор неорганического фосфата с концентрацией
31

мкг/мл (в расчете
на
Р
).

2.

М
олибд
ат

аммония


(
N
Н
4
)
2
MoO
4
,

2
% водный раствор.

3.

3М ацетатный буфер, рН 4,5
.

4.

Раствор аскорбиново
й кислоты с концентрацией 10 мг/мл.

5.

10

пустых
пробирок в штативе

для стандартного ряда фосфата

(пробирки 1
-
6) и
для
опытных проб (пробирки 8
-
10)
.

6.

Две пробирки
Х1

и
Х
2

(опытные пробы)
, которые содержат по
4

мл раствора глюкозо
-
6
-
фосфата с одинаковой концент
рацией, в который либо не был (пробирка
Х
1), либо
был добавлен (пробирка
Х
2) раствор фермента щелочной фосфатазы (отщепляет
неорганический фосфат от глюкозо
-
6
-
фосфата) до конечной концентрации
1
0 мкг/мл.
Пробирка
Х
2 инкубировалась
2
0 мин при 25
С, после че
го реакция была остановлена.

Ход определения:

К исследуемому раствору, содержащему неорганический фосфат

(пробы
1
-
10
)
, приливают дистиллированную воду до
1
,
0

мл, добавляют
1

мл ацетатного буфера, 0,5

мл
молибдата аммони
я

и 0,
5

мл раствора
аскорбиновой кис
лоты
. Содержимое пробир
ок
тщательно
перемешивают и оставляют на
5
-
1
0

мин при комнатной температуре.

Следят за
развитием окраски.


Задание 1 (
1
0

баллов).

Впишите в Таблицу те объемы раствора фосфата и воды, которые Вы
добавили в пробирки 1
-
6, и з
аполните пр
об
ирки
, согласно
Вашим

расчетам
:



пробы

Количест
во

фосфата,
мкг

Станд.
раствор

фосфата,
мл

Проба
Х1, мл

Проба
Х2, мл

Н
2
О,
мл

(до 1
мл)

Ацетатн
ый
буфер
,

1

мл

(
N
Н
4
)
2
MoO
4
,

0,5 мл

Аскор

бат,

0,5 мл



*

1

0


-

-






2

6,2


-

-






3

12,4


-

-






4

18,
6


-

-






5

24,8


-

-






6

31,0


-

-






7

-

-

1,0 мл

-

-





8

-

-

1,0 мл

-

-




9

-

-

-

1,0 мл

-





10

-

-

-

1,0 мл

-





Оставьте пробирки на столе на
5
-
1
0

мин.


Задание 2 (
3

балл
а
).

Пока развивается окраска,
решите следующую задачу. Оди
н грамм
пшеничной муки с влажностью 8% полностью окислили серной кислотой при нагревании.
Полученный материал нейтрализовали щѐлочью и
объѐм раствора
довели до 100 мл. В
полученном растворе определили содержание фосфата. Оно составило 0,32 мкмоля в мл.
Как
ово содержание фосфора в муке в % на сухой вес?

Ответ округлите до второго знака
после запятой.


Содержание фосфора составляет

__________________
% на сухой вес

муки
.


Задание 3 (
7

балов).

Р
ассчитайте, какова концентрация стандартного раствора фосфата
,
отв
ет выразите в
мМ

(
2 балла
).

После развития окраски сравните пробирки
7, 8

и
9, 10

(пробы
Х1

и
Х2
)
с пробирками
из стандартного ряда (пробирки 1
-
6) и определите в них содержание неорганического
фосфата. Поставьте знак «плюс» в последнем столбце (*) Таблицы
напротив тех проб
стандартного ряда, с которыми совпадает окраска проб
ирок 7, 8

и
9, 10

и впишите в это
т
столбец содержание фосфата в пробах
Х1

и
Х2 в
мкг/мл
.

Рассчитайте активность фермента щелочной фосфатазы, выразив еѐ в международных
единицах активност
и ферментов

(
мкмоль/мин на 1 мг белка
)

(
5 баллов
).




К
онцентрация стандартного раствора
фосфата





мМ


Активность фермента щелочной
фосфатазы




мкмоль/мин на 1 мг белка



З
ак
ончив работу, штативы и заполненные лист
ы

ответов оставьте на рабочем месте и
позовите преподавателя, который примет Вашу работу.

Все расчеты производить только на
обратной стороне
лист
ов

ответа!




Приложенные файлы

  • pdf 35682965
    Размер файла: 122 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий